初名甡，字应祯，後以字行，更字贞伯，一名维熙、维熊，号范庵，长洲（今江苏苏州）人。景泰四年（1453）举乡试，会试礼部中乙榜，成化元年（1465）授中书舍人，弘治四年（1491）官至南京太仆少卿。
他博学好古，尤擅书法。丰坊《书诀》称其“真书学欧阳询、颜真卿，得蔡襄用笔之法”。朱谋垔《续书史会要》称：“少卿书真、行、草、隶，皆清润端方，如其为人。” 35岁即入太学成为中书舍人的李应祯，其早期书法必在台阁体范围之内，所以王世贞跋《三吴楷法二十四册》称其“行笔皆赵吴兴”。孙鑛评《李范庵卷》更明确指出他的楷书“大约从二沈来”。但随着他对书法的深研，而逐渐脱去时风的羁绊。李应祯可贵之处在十分重视传统古法的学习．并由宋至唐而溯源晋人。文徽明于《跋李少卿帖》中云：
(应祯)凡运指、凝思、吮毫、濡墨，与字之起落、转换、大小、向背、长短、疏密、高下、疾徐．莫不有法。盖公虽潜心古法，而所自得为多，当为国朝第一。其尤妙能三指尖搦管，虚腕疾书．今人莫能为也。予虽知之，而心手不逮，盖数年来未始有得。
他十分佩服李应祯对于古法的掌握。但文徵明已指出李应祯在传统学习上“自得为多”，这也正是李应祯本人所主张的反对奴书而欲求自家面目。这种思想在李应祯的论书中。多所流露。文徵明记曰：
公既多阅古帖，又深诣三昧，遂自成家，而古法不亡。尝一日，阅某书(按．指文徵明自己的书法)有涉玉局(苏东坡)笔意，因大咤曰：“破却工夫，何至随人脚踵?就令学成王羲之，只是他人书耳。”
中书舍人出身的李应祯这种不愿“随人脚踵”成“他人书”的书法观．是对其亲身经历过的台阁体书法的反叛．在当时台阁体尚存馀威的时代，是十分难能可贵的，他集中反映了吴门文人书家不满当时书风的思潮。可惜的是李应桢的书法过分追求意趣，又为时代所压，并未恰到好处地将传统与独创结合起来，又每每耻以书法见名，不喜人求其书，所以作品未臻佳境，风格并不鲜明．传世也甚少。
李应祯与文徵明父亲文林为同僚．文徵明曾从其学书，他对古法的探究使文徵明深受影响．文徵明曾经想收集李应祯的书论辑为《李公论书录》，然未能完成。李应祯又是祝允明的岳父。祝允明曾得到他的亲授．可见吴门书派的两位最重要的领军书家都曾得到他的指点。
其传世作品以尺牍为主，有《缉熙帖》，藏北京故宫博物院。 李应祯的尺牍，秀丽而又有气度，行笔自然大方，横向取势的撇、捺、横都很生动有致，字的大小，粗细变化自然。《枉问帖》纸本。纵22.6厘米，横41.5厘米。现藏北京故宫博物院。此帖一封书信，用笔厚重遒劲，气势开张，颇有后世碑学气息。
